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聚乙二醇(PEG)置换法测定LgG

阅读次数：1239 发布时间：2013/5/2 10:22:53

聚乙二醇（PEG）置换法
水溶性非离子型聚合物沉淀法常用的聚合物为聚乙二醇（PEG）及右旋糖酐．水溶性聚合物
沉淀蛋白质的机制还不清楚，大致有如下解释：聚合物与蛋白质形成共沉物；聚合物与蛋白质之间发生水的重分配；聚合物与蛋白质形成复合物．此法受许多因素影响，主要是pH、离子强度、蛋白质浓度和PEG的分子量等．PEG在浓度为3％～4％时可沉淀去除了蛋黄脂磷蛋白及脂质，6％～7％可沉淀IgM，8％～12％沉淀IgG，12％～15％沉淀
其他球蛋白，25％则沉淀自蛋白．在10 mL人血清中加入等量0．025 M pH7．8
的磷酸盐缓冲液（PBS）后，再加入分子量为1 000的PEG溶液，终浓度为16％，将试样分别置旋涡混合器上混匀，置冰箱（4℃）过夜，次日离心5～10rain（2 500 rpm），弃上清，沉淀用0．025M pH7．8的PBS溶解，直接上DEAE纤维素柱层析，以0．0175M pH6．3的PBS洗脱．在此条件下分离人IgG其比活性为0．95 mg／mg蛋自质，活性回收率为95％n引．

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