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抗乙酰胆碱受体抗体最新检测方法公布

阅读次数:1514   发布时间:2013/4/26 10:11:04

 

 
乙酰胆碱受体包括两种:毒蕈碱型受体(M受体---G蛋白偶联型受体),产生副交感神经兴奋效应,既心脏活动抑制,支气管胃肠平滑肌和膀胱逼尿肌收缩,消化腺分泌增加,瞳孔缩小等。阿托品为毒蕈碱受体阻断剂。烟碱型受体(N受体---离子通道型受体),N1位于神经节突触后膜,可引起自主神经节的节后神经元兴奋,N2受体位于骨骼肌终板膜,可引起运动终板电位,导致骨骼肌兴奋。六烃季胺主要阻断N1受体功能,筒箭毒碱阻断N2受体功能。
    重症肌无力(myastheniagravis,MG)是一种神经肌肉系统疾病,由于病人的自身抗体与神经肌肉连接处的乙酰胆碱受体(acetylcholinereceptor,AchR)结合,对此受体起封闭和破坏作用。由于此种受体的大量破坏,从而发生神经的冲动不能传导至肌肉,其主要临床表现为肢体软弱无力。抗AchR抗体主要为IgC型(以IgCl、IGC.2亚类为主,IgC.亚类次之),可检测到IgM型。不同类型的MG病人血清抗AchR抗体具有不同性质。抗AchR抗体的检测方法*先使用的是放射免疫,以后,为避免使用核素,各种酶联免疫法应运而生。这些检测方法中都要应用。·银环蛇毒素(a-bungarotoxin,a-BT):a-BT是从银环蛇毒液中提取的一种肽类,分子量为8kD左右。它能高度选择性与AchR结合,这种结合几乎是不可逆的。如用ELISA法,可用ct-BT预先包被固相载体,然后利用其特异性吸附加入的AchR,再测定待测血清中的抗AchR抗体。ELISA法简便易行,便于推广,故将其介绍如下。
 
    1.试剂  ①a-BT:可购得商品;②AchR:取人骨骼肌200—250g,用生理盐水洗净,加入湿重2倍量的缓冲液,高速匀浆90s后20 000Xg离心30rain。除去上清(血液、脂质),加入湿重2倍量的缓冲液,再次匀浆。向其中加入TritonX-100至*终浓度为2%,4℃搅拌过夜。100 000Xg离心1h,上清即为AchR。也可购买商品;③HRP标记的抗人IgC。
 
    2.操作步骤
    (1)用包被液将ct-BT稀释为*适浓度(用方阵滴定法选出),包被聚苯乙烯反应板,每孔200pL(含ct-BT约为2.5pmol/L)。4℃过夜后用洗涤液洗3次,每次3min(以下同)。
    (2)将AchR用稀释液适当稀释,加至包被孔中,每孔200btL(0.2pm01),37~C1h。同上洗涤。
    (3)力[1X适当稀释的待测血清,每孔200gL,37℃30min。同上洗涤。
    (4)加入*适工作浓度的HRP标记抗人IgC,37℃30rain。同上洗涤。
    (5)加入底物溶液(OPD-H202)每孔200L,37℃ 30min,mol/LH2S04终止反应。
 
    3.结果观察  于酶标仪上测492nm吸光度。以阳性混合血清作为标准血清,制备标准曲线。待测血清中抗AchR抗体含量,可根据吸光度从标准曲线上换算。
 
    4.正常范围与临床意义  须对正常人和相关疾病患者进行调查,确定正常上限。抗AchR抗体是MG的主要自身抗体,总的阳性率在63%、90%之间。抗体滴度基本上与病情严重程度相关。有效治疗后该抗体水平下降,临床恶化时又可见该抗体滴度上升。抗AchR抗体的阳性检出率除与前述的抗原有关外,还与肌无力的临床类型、人种和是否伴发其他自身免疫病等因素有关。我国人口中的MG总抗体水平较低,但在降低阳性标准后,其阳性率与欧美国家相近。然而,有部分MG患者血清中测不到抗AchR抗体。因此,抗AchR抗体阴性不能否定MG的诊断。应当指出,抗AchR抗体阳性还可见于胆汁性肝硬化、癫痫、强直性肌营养不良、DOWN病等。

上海恒远生物抗乙酰胆碱受体抗体*新检测方法公布,为新老客户提供优质的实验服务。全新的售后管理。

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