染色薄层色谱糖脂

－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－

染色薄层色谱可以非常敏感的检测功能活性碳水化合物配体蛋白受体（1，2）。这些碳水化合物结构检测糖脂分子从复杂的混合物中提取出相关的靶组织。一些蛋白质受体可能分析：抗体，嵌合免疫球蛋白蛋白，凝集素，选择素，毒素，和其他碳水化合物结合蛋白。这种方法可以测定的数量，大小（值）和费用（结合离子色谱法）的碳水化合物配体（）。此外，这种方法在确定艾滋病方法用于纯化的糖脂配体和随后监测净化过程（3，4）。相反，糖蛋白，糖脂含有一个半抗原寡糖和分子因此，一旦纯化和结构特点，糖脂是功能活跃的碳水化合物序列的蛋白受体的研究。

材料：

层析槽

支持薄层硅胶板荧光指标

玻璃微量注射器

培养皿（150毫米）

玻璃显微镜幻灯片

# 1过滤纸滤纸

加热干燥机

喷涂装置

塑料挤压瓶

聚异丁基甲基丙烯酸甲酯

丙酮

氯仿

甲醇

氯化钾

磷酸盐缓冲液（0.01米磷酸钠，氯化钠的先锋，PH值7.6）

牛血清白蛋白

苔黑酚

间苯二酚

二氨基联苯胺盐酸盐（民建联）

协议：

制备的色谱槽

1。添加150毫升氯仿/甲醇／0.25%氯化钾（5时04分01秒）到一个玻璃层析槽（25厘米×27厘米×10厘米）内衬过滤纸，盖紧。

2。允许蒸汽坦克平衡至少2小时。的结果是，准备一个新的坦克日报。

制备硅胶板

1。切板所需的大小用剪刀。*佳高度为10厘米。

2。画一个非常轻铅笔线1.5厘米的平行板的底部被不小心划伤硅胶。

3。使用玻璃为糖脂，现场样品沿5毫米路径上的铅笔线。这些不同的路径（道）的2.5毫米。

4。待测样品的糖含量的地衣酚喷雾应放在一起一部分的薄层板分离的样品染色。

层析硅胶板

1。使用一对长钳，抓板顶部和在坦克与斑样本只是以上级别的溶剂。允许顶部边缘紧靠后的发展室。

2。掩护坦克紧密，使板保持原状直到升溶剂线到达板的顶部（约30 - 45分钟）。

3。将薄层板的顶部边缘的抓钳和允许板彻底干燥空气下化学通风橱。

染色标准的碳水化合物

1。剪除部分的薄层板含有糖脂标准。

2。在化学烟罩，喷板简述0.1%地衣酚溶解在5% H2SO 4。

3。立即放在一个加热炉在120摄氏°大约5 - 10分钟。

4。如果染色弱，步骤2和3可以重复。

制备的层析板染色

1。2µ我正（碳水化合物结合蛋白）和消极的（牛血清白蛋白）控制（0.5毫克/毫升）在底部的薄层板和允许完全干燥空气。

2。浸渍薄层板为90秒，在一个玻璃培养皿（150毫米）含有0.1%的解决polyisobutylmethacrylate珠predissolved丙酮。的结果，板应进入溶液迅速，长边的，在45度角。

3。拆下板与直立根据化学烟罩完全风干。

4。测量表面面积的薄层板。

5。喷雾薄层板与磷酸盐缓冲液含1%牛血清白蛋白和大力淹没立即在同一溶液中培养皿1小时。

染色的主要碳水化合物结合蛋白

1。稀碳水化合物结合蛋白（如抗体）10µ克/毫升含1%牛血清白蛋白在公共电视网。数额将覆盖65µ升/平方厘米的薄层板的表面。

2。准备一个底座略小于薄层板与玻璃显微镜幻灯片底部的一个培养皿。

3。将薄层板从pbs-1 %牛血清白蛋白，排水，和水平放置，硅胶的一面，上盖的玻璃滑动底座。不要让板干在任何步骤直到结束