简介：
谷胱甘肽（glutathione，r-glutamyl cysteingl +glycine，GSH）是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，存在于几乎身体的每一个细胞。谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统功能，并具有抗氧化作用、整合解毒作用 。半胱氨酸上的巯基为其活性基团（故常简写为G-SH），易与某些药物、毒素等结合，使其具有整合解毒作用。
操作步骤：
一、材料准备
1. 包被液：0.05 mol/l（pH9.6）碳酸盐缓冲液：Na2CO3 0.159 g，NaHCO3 0.294 g，用蒸馏水溶解后，定容至100 ml。
2. PBS-T洗涤液：0.01mol/ pH7.4磷酸盐-氯化钠缓冲液：NaCl 8.0 g，KH2PO4 0.2 g，Na2HPO4·12H2O 2.9 g，KCl 0.2 g，吐温-20 0.5 ml，用蒸馏水溶解后，定容至1000 ml。
3. 底物溶液3，3’，5,5‘-四甲基联苯胺（TMB）贮存液及应用液：
（1）0.1 mol/l pH6.8 PBS：Na2HPO4·12H2O 1.09 g，NaH2PO4·H2O 6.05 g，蒸馏水溶解后定容至500 ml，4℃保存备用。
（2）TMB贮备液：TMB 60 mg 溶于10 ml 二甲基亚砜（DMSO）中4℃保存备用。
（3）TMB应用液：临用取0.1 mol/l pH6.0 PBS 10 ml，TMB贮备液100 ul，30%H2O2 15 ul 混匀即可。
二、实验步骤
1. 抗体包被
（1）抗体用包被液稀释至20 ug/ml，加入聚苯乙烯反应板中每孔100 ul，加盖后放4℃过夜。
（2）倾去孔内液体，加入洗涤液后静置3 min，倾尽洗涤液，重复洗涤3次。
（3）将反应板口在吸水纸上，以除尽液体。
2. 封闭：每孔加入200 ul封闭液，37℃孵育60 min，然后洗涤3次。
3. 加入待测血清，37℃温育1~2 h，洗涤3次。用稀释液作对照孔，标准曲线的制备是用不容稀释度的纯GST-π。
4. 加酶标抗体：按要求稀释抗GST-π-IgG-HRP，每孔100 ul，37℃温育1 h，然后洗涤5次，扣在吸水纸上吸干水分。
5. 显色：加入TMB应用液，置室温反应15~30 min，加入50 ul 2 mol/l H2SO4，稳定3~5 min，即可比色。
6. 比色：用酶标仪，以PBS-T孔为对照，波长450 nm，测各孔光吸收度（A），查标准曲线，即可测得GST-π含量。
参考文献：
1.【文献标题】Tissue engineered artificial liver model based on viscoelastic hyaluronan-collagen hydrogel ａnd the effect of EGCG intervention on ALD
2.【文献标题】Analysis of the effect of probucol-mecobalamin tablets combination on oxidative stress in patients with diabetic peripheral neuropathy
3.【文献标题】Effects of sublethal concentrations of cyantraniliprole on the biology ａnd metabolic enzyme activities of Laodelphax striatellus (Fall′en)
原创作者：上海恒远生物科技有限公司
总访问量：7375930 
