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点击次数:4561 发布时间:2013/6/3 9:51:00
elisa试剂盒检测步骤及注意事项
操作步骤:
用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。
↓
加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
↓
于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml, 37℃孵育30-60分钟,洗涤,*后一遍用DDW洗涤。
↓
加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
↓
终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
↓
结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
注:
1.
用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2.
每次实验留一孔作为空白调零孔,
该孔不加任何试剂,
只是*后加底物溶液及
2N
H2SO4
。
测量时先用此孔调
OD
值至零。
3.
为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
4.
未使用完的酶标板或者试剂,请于
2-8
℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过
氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。请勿重复使用已稀释过的标准品、
生
物素标记抗体工作液或、辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。
5.
建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
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