大肠杆菌感受态细胞的原理

原理：

转化（Transformation ）：将外源DNA 分子引入受体细菌，使之获得新的遗传性状。

受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株，不含限制性内切酶 和甲基化酶的突变体（R-,M-），可以容忍外源DNA 分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法，如电击或CaCl₂ 、RbCl/KCl等化学试剂的处理后,细胞膜的通透性增高，成为感受态细胞（Compenent cells），使外源DNA 分子得以进入。

目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl₂ 和RbCl/KCl法，RbCl/KCl法制备的感受态细胞转化效率较高，但CaCl₂ 法简便易行，且其转化效率完全可以满足一般实验的要求，制备出的感受态细胞暂时不用时，可加入无菌甘油至总体积15％，于-70℃保存半年之久，因此CaCl₂ 法为使用更广泛。

准备：

1、配制0.05mol/L CaCl₂ -15%甘油混合溶液，高温高压灭菌；

注： CaCl₂ 必须为分析纯以上。

2、实验中所需的所有试管 、培养瓶 、离心管 等均要用去离子水彻底清洗干净，高温高压灭菌；

注： 有制备感受态细菌专用的一套实验器材。

3、受体菌的培养：从非选择性LB平板上挑取E.coli单菌落,接种于3-5ml LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜至对数生长中后期。将该菌悬液以1:100的比例接种于50~100ml LB液体培养基中,37℃振荡培养2.5小时至OD₆₀₀ =0.5。注：培养时间不宜超过2.5小时，否则不能达到转化效率。

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