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点击次数:4192 发布时间:2013/4/17 9:53:00
抗体鉴定
检测抗多肽反应是否发生的*简单方法就是抗多肽ELISA。有两种技术可以将多肽链接到ELISA板上。种方法就是直接将多肽链接到盘上。但如果链接氨基酸恰好是抗原决定簇的一部分,则抗体无法和多肽进一步链接,这样产生假阴性结果的可能性增加。第二种方法则是先将多肽与载体蛋白耦合,然后将多肽-蛋白 耦合体链接到ELISA盘上。这种链接方法会使抗体-多肽的结合成功率提高,因为多肽不是直接嵌入盘膜,因而会更加暴露给抗体。这种方法因而更可靠,可重复性更高。需要注意的是,用于该方法的载体蛋白必须不同于用于免疫耦合的载体蛋白。这样会避免血清中抗载体蛋白反应所导致的高背景反应。
当做血清检测时,另一点需要记住的是,由于免疫多肽与自然多肽结构上的差别,检测时的抗多肽反应与试剂的抗多肽反应可能是不同的。任何检测,尤其是测定滴定量以决定收获点时,必须包括针对天然状态下蛋白的检测。当然可以做针对天然状态下蛋白的ELISA;但由于血清在不同检测体系中表现会不一样,因此在血清被日常使用的体系中进行蛋白识别鉴定。如果血清将用于免疫沉淀反应,就应该进行针对该反应的检测。
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