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点击次数：4191 发布时间：2013/4/15 10:27:47
ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法（图a）、用于检测抗原的双抗体夹心法（图b）以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸（98％）21.7ml。
ELISA试剂盒，人ELISA试剂盒，大鼠ELISA试剂盒，小鼠ELISA试剂盒，裸鼠ELISA试剂盒，仓鼠ELISA试剂盒
聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，
每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。
加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔
中,置37℃孵育1小时,洗涤。（同时做空白、阴性及阳性孔对照）
于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，
37℃孵育30-60分钟，洗涤,*后一遍用DDW洗涤。
1. 正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
原创作者：上海恒远生物科技有限公司
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